集中空调送风中β-溶血性链球菌检验方法(规范性附录F)

　　本附录规定了用培养法测定集中空调系统送风中的β一溶血性链球菌。

 

　　下列术语和定义适用于本方法。

　　F.2.1

　　β一溶血性链球菌  β-hemolytic  streptococcus

　　集中空调系统送风中采集的样品，经35℃～37℃、24 h～48 h培养，在血琼脂平板上形成的典型菌落。

 

　　F.3.1  六级筛孔撞击式微生物采样器。

　　F.3.2 高压蒸汽灭菌器。

　　F.3.3 恒温培养箱。

　　F.3.4 平皿：Φ90 mm。

 

　　F.4.1  血琼脂平板成分：

　　蛋白胨    10 g

　　氯化钠    5g

　　琼脂    20 g

　　脱纤维羊血    5 mL～10 mL

　　蒸馏水    1000 mL

　　F.4.2制法：将蛋白胨、氯化钠、肉膏加热溶化于蒸馏水中，校正pH为7.4～7.6，加入琼脂，121℃20 min灭菌。待冷却至50℃左右，以无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀倾皿。

 

　　F.5.1  采样点：每套空调系统选择3个～5个送风口进行检测．每个风口设置1个检测点，一般设在送风口下方15 cm～20 cm、水平方向向外50 cm~100 cm处。

　　F.5.2采样环境条件：采样时集中空凋系统必须在正常运转条件下．并关闭门窗15 min～30 min以上，尽量减少人员活动幅度与频率．记录室内人员数量、温湿度与天气状况等， 

　　F.5.3  采样方法：以无菌操作，使用撞击式微生物采样器（D.3.1）以28.3 L／min流量采集5 min-15 min。

 

　　F.6.1  培养方法：采样后的血琼脂平板在35℃～37℃下培养24 h～48 h。

　　F.6.2 结果观察：培养后，在血琼脂平板上形成呈灰白色、表面突起、直径0.5 mm~0.7 mm的细小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；镜检为革蓝氏阳性无芽孢球菌，圆形或卵圆形，呈链状排列，受培养与操作条件影响链的长度在4个~8个细胞至几十个细胞之间；菌落周围有明显的2 mm～4 mm界限分明、完全透明的无色溶血环。符合上述特征的菌落为β溶血性链球菌：

 

　　F.7.1 送风口β一溶血性链球菌测定结果：菌落计数，记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m3（空气中菌落形成单位每立方米）。

　　F.7.2 集中空调系统送风中β一溶血性链球菌测定结果：一个系统送风中β一溶血性链球菌的测定结果按该系统全部检测的送风口β一溶血性链球菌测定值中的最大值给出。