全国统一服务热线400-636-8066
技术中心

TECHNOLOGY

            最新动态MORE
            法律法规

            首页 技术中心 法律法规

            集中空调系统冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检验方法(规范性附录B)
            发布时间:2014-06-07字体大小打印

             B.1 总则

              本附录规定了用培养法定性测定集中空调系统冷却水、冷凝水及其形成的沉积物、软泥等样品中的嗜肺军团菌,其他洗浴水、温泉水、景观水等样品中的嗜肺军团菌测定可参照执行。
             
            B.2 术语和定义
              下列术语和定义适用于本方法。
              B.2.1
              嗜肺军团菌  legionella pneumophila
              样品经培养在GVPC琼脂平板上生成典型菌落,并在BCYE琼脂平板上生长而在L-半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板不生长,进一步经生化实验和血清学实验鉴定确认的菌落。
             
            B.3 仪器和设备
              B.3.1 平皿:Φ90 mm。
              B.3.2   CO2培养箱:35℃~37℃。
              B.3.3  紫外灯:波长360 nm±2 nm。
              B.3.4 滤膜过滤器。
              B.3.5  滤膜:孔径0. 22 μm~0. 45 μm。
              B.3.6 真空泵。
              B.3.7 离心机。
              B.3.8 涡旋振荡器。
              B.3.9 普通光学显微镜、荧光显微镜。
              B.3. 10 水浴箱。
              B.3. 11  广口采样瓶:玻璃或聚乙烯材料,磨口,容积500 mL。
             
            B.4 培养基和试剂
              B.4,1  GVPC琼脂平板。
              B.4.2  BCYE琼脂平板。
              B.4.3  BCYE-CYE琼脂平板。
              B.4.4 革兰氏染色液。
              B.4.5  马尿酸盐生化反应管。
              B.4.6 军团菌分型血清试剂。 
             
            B.5 采样
              B.5.1 将广口采样瓶(B.3.11)用前灭菌。
              B.5.2  每瓶中加入Na2S203溶液(c=0.1 mol/L)O.3 ml_~0.5 mL,中和样品中的氧化物。
              B.5.3 水样采集位置:冷却水采样点设置在距塔壁20 cm、液面下10 cm处,冷凝水采样点设置在排水管或冷凝水盘处。
              B.5.4 每个采样点依无菌操作取水样约500 mL。
              B.5.5 采集的样品2d内送达实验室,不必冷冻,但要避光和防止受热,室温下贮存不得超过15 d。
             
            B.6 检验步骤
              B.6.1  样品的沉淀或离心:如有杂质可静置沉淀或1000 r/min离心1 min去除。
              B.6.2 样品的过滤:将经沉淀或离心的样品通过滤膜(B.3.5)过滤,取下滤膜置于15 mL灭菌水中,充分洗脱,备用。
              B.6.3 样品的热处理:取1 mL洗脱样品,置50℃水浴(B.3.10)加热30 min。
              B.6.4 样品的酸处理:取5 mL洗脱样品,调pH至2.2,轻轻摇匀,放置5 mm。
              B.6.5 样品的接种:取洗脱样品(B.6.2)、热处理样品(B.6.3)及酸处理样品(B.6.4)各0. 1 mL,分别接种GVPC平板(B.4.1)。
              B.6.6  样品的培养:将接种平板静置于CO2培荞箱(B.3.2)中,温度为35℃-37℃,CO:浓度为2. 5%。无CO2培养箱可采用烛缸培养法。观察到有培养物生成时,反转平板,孵育10 d,注意保湿。
              B.6.7 菌落观察:军团菌生长缓慢,易被其他菌掩盖,从孵育第3天开始每天在显微镜(B.3.9)上观察。军团菌的菌落颜色多样,通常呈白色、灰色、蓝色或紫色,也能显深褐色、灰绿色、深红色;菌落整齐,表面光滑,呈典型毛玻璃状,在紫外灯下,部分菌落有荧光。
              B.6.8 菌落验证:从平皿上挑取2个可疑菌落,接种BCYE琼脂平板(B.4.2)和L-半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板(B.4.3),35℃~37℃培养2 d,凡在BCYE琼脂平板上生长而在L一半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板不生长的则为军团菌菌落。
              B.6.9 菌型确定:应进行生化培养与血清学实验确定嗜肺军团菌。生化培养:氧化酶(-/弱+),硝酸盐还原(-),尿素酶(-),明胶液化(+).水解马尿酸。血清学实验:用嗜肺军团菌诊断血清进行分型。
            您的需求
            了解产品
            亚欣动态
            走进亚欣